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中國(guó)有很多栽培釀酒葡萄的產(chǎn)區(qū)，不同的產(chǎn)區(qū)有著不同的氣候和生態(tài)環(huán)境特點(diǎn)，而影響釀酒葡萄品質(zhì)的因素很多，光照、溫度、濕度和水分等以及土壤營(yíng)養(yǎng)條件及土壤結(jié)構(gòu)都對(duì)葡萄果實(shí)品質(zhì)產(chǎn)生影響。光照是葡萄生長(zhǎng)發(fā)育的必備條件，光照強(qiáng)度、日照長(zhǎng)度、光譜成分的不同都會(huì)影響葡萄與葡萄酒的品質(zhì)。良好的光照條件與漿果著色、品質(zhì)、產(chǎn)量的形成等都密切相關(guān)。

山東的氣候?qū)?strong style="box-sizing: border-box;">暖溫帶季風(fēng)氣候類型。特點(diǎn)是降水集中,雨熱同季,春秋短暫,冬夏較長(zhǎng)。成熟期的陰雨存在糖含量不足，綜合品質(zhì)受到限制等問(wèn)題。因此，調(diào)控釀酒葡萄葉幕光環(huán)境對(duì)釀酒葡萄品質(zhì)有著重要的作用。

供試品種為釀酒葡萄品種馬瑟蘭，位于山東蓬萊的中糧長(zhǎng)城葡萄酒基地。

在山東蓬萊的中糧長(zhǎng)城葡萄酒基地，對(duì)馬瑟蘭葡萄品種在地面水平鋪設(shè)三種材質(zhì)的反光膜來(lái)增強(qiáng)葉幕的光照強(qiáng)度，進(jìn)行六種反光膜鋪設(shè)方式：鋁塑反光膜1m水平處理、鋁塑反光膜0.5m水平處理、綠色園藝布1m水平處理、綠色園藝布0.5m水平處理、白色園藝布1m水平處理、白色園藝布0.5m水平處理。

2.3.1 果實(shí)生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定

百粒重。

從每個(gè)果穗的上中下三個(gè)部位隨機(jī)選取20個(gè)果粒，之后將所有果?；旌虾筮x取100粒，在電子天平上稱重，計(jì)算單粒重，并重復(fù)三次操作計(jì)算平均值。

2.3.2 果實(shí)基本理化指標(biāo)測(cè)定

可溶性固形物：手持測(cè)糖儀測(cè)定。

pH值：pH計(jì)測(cè)定。

滴定酸：滴定法測(cè)定。

總糖（葡萄糖）：參考王華(1999)的方法測(cè)定。

有機(jī)酸：樣品榨汁，5000g離心，-40℃保存?zhèn)溆?。樣品在?shí)驗(yàn)室室溫下融解，充分搖勻后吸取樣1 mL，稀釋5倍，用0.22μm微孔膜過(guò)濾，備用。采用 Waters1525高效液相色譜系統(tǒng)，采用DIKMA Platisil NH2（250x4.6mm, 5μm）色譜柱；流動(dòng)相25mM的磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)pH至2.5），流速1.0 mL/min，柱溫25℃，采用waters2998二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。

2.3.3葡萄酒基本理化指標(biāo)測(cè)定

殘?zhí)?以葡萄糖計(jì))、總酸(以酒石酸計(jì))、pH值等；酒精度、揮發(fā)酸、硫、干浸出物用FTIR葡萄酒分析儀測(cè)定。

2.3.4 葡萄果實(shí)與葡萄酒中酚類物質(zhì)測(cè)定

（1）葡萄與葡萄酒中酚類物質(zhì)各分類的總量測(cè)定

葡萄果皮中的酚類物質(zhì)的提取參考江雨(2016)的方法利用鹽酸甲醇溶液進(jìn)行提取，將提取液置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

① 總酚。葡萄果實(shí)與葡萄酒總酚含量使用福林-肖卡法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果以沒(méi)食子酸計(jì)。

② 總單寧。葡萄果皮與葡萄酒中單寧的測(cè)定采用甲基纖維素沉淀法(MCP法)進(jìn)行，結(jié)果以兒茶素計(jì)。

③ 總花色苷。葡萄果皮與葡萄酒總花色苷含量參考劉金串等（2012）的方法利用pH示差法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果以矢車菊素-3-葡萄糖苷等價(jià)值表示。

④ 總黃烷三醇。葡萄果皮中的總黃烷-3-醇采用 p-DMACA-鹽酸法進(jìn)行。結(jié)果以(+)-兒茶素計(jì)。

⑤ 總類黃酮。葡萄果實(shí)與葡萄酒總類黃酮的測(cè)定參照Ivanova等（2012）的方法進(jìn)行，略有修改，結(jié)果以蘆丁計(jì)。

（2） 葡萄與葡萄酒中單體酚類物質(zhì)測(cè)定

①葡萄皮與葡萄酒中花色苷物質(zhì)的提取檢測(cè)

A. 果皮中花色苷提取檢測(cè)方法如下：

準(zhǔn)確稱取0.250 g(記錄)葡萄皮干粉于50 mL 離心管，加入5 ml 提取劑，提取劑由甲醇:甲酸（V:V）（分析純）為98:2 的比例配制而成，避光超聲10 min（超聲溫度保持20 ℃，功率為100 W），25 ℃條件下避光搖床震蕩30min（130 r/min），然后 8000 g 離心 10 min，用1 mL 移液槍轉(zhuǎn)移上清液至對(duì)應(yīng)50 mL 離心管，如此提取步驟重復(fù)4 次，合并上清液（累計(jì)20 mL左右）并在 30 ℃條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，剩余物質(zhì)用定溶劑（定溶劑為液相檢測(cè)室流動(dòng)相A:B  體積比為9:1配制）（流動(dòng)相A:甲酸:乙腈:水=2:6:92,流動(dòng)相; B:甲酸:乙腈:水=2:54:44）定容為5 mL。樣品于-80 ℃ 冰箱保存以備上機(jī)檢測(cè)。每生物學(xué)重復(fù)取一次。

花色苷物質(zhì)檢測(cè)采用Agilent 1100系列 LC/MSD Trap-VL液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀配有二極管陣列檢測(cè)器（DAD）進(jìn)行樣品的定性和定量分析。流動(dòng)相 A：甲酸：乙腈：水=2:6:92，流動(dòng)相 B：甲酸：乙腈：水=2:54:44。流動(dòng)相洗脫程序如下：1~18 min，10%~25% B；18~20 min，25% B；20~30 min，25%~40% B；30~35 min，40%~70% B；35~40 min，70% ~100% B。流動(dòng)相的流速為 1.0 mL/min；柱溫為50 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為525 nm；波長(zhǎng)掃描在200~900 nm；進(jìn)樣量為30 μL。質(zhì)譜條件為：電噴霧離子源（ESI），正離子模式。離子掃描范圍為100~1500 m/z；霧化器壓力為35 psi；干燥氣流速為12 L/min；干燥氣溫度為300 ℃。每個(gè)樣品重復(fù)進(jìn)樣兩次，做為2次技術(shù)重復(fù)。

花色苷定量以二甲花翠素葡萄糖苷為外標(biāo)物做標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)出的花色苷類物質(zhì)均以二甲花翠素葡萄糖苷的含量計(jì)，果皮中花色苷濃度單位用mg/kg（果實(shí)鮮重）表示。

B. 葡萄酒花色苷酚類物質(zhì)檢測(cè)方法如下：

取2 ml待測(cè)酒樣，離心，經(jīng)過(guò)0.45 μm的無(wú)機(jī)濾膜（聚醚砜）過(guò)濾，樣品直接進(jìn)行HPLC-MS分析。葡萄酒花色苷類物質(zhì)的HPLC-MS檢測(cè)方法同葡萄果實(shí)花色苷HPLC-MS檢測(cè)方法。

②葡萄皮與葡萄酒中非花色苷酚類物質(zhì)的提取檢測(cè)

A.果皮中非花色苷酚類物質(zhì)的提取檢測(cè)如下：

準(zhǔn)確稱取1 g葡萄皮干粉于50 mL 離心管中，加入1 mL 蒸餾水和9 mL 乙酸乙酯(分析純)，25 ℃ 條件下避光搖床震蕩30 min(搖床轉(zhuǎn)速 130 g)，8000 g 離心5 min，用1 mL 移液槍轉(zhuǎn)移上清液于對(duì)應(yīng)50 mL 離心管中，重復(fù)4次(上清液加黑色袋遮光)，合并上清液(累計(jì)40 mL左右)于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀33℃蒸發(fā)至干，色譜甲醇定容至1 mL。

實(shí)驗(yàn)采用 Agilent 1200 系列 LC/MSD 離子阱液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括在線G1379A 真空溶劑脫氣機(jī)、G13llA 四元高壓梯度泵、G1313A 自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A 柱溫箱、G1315A 二極管陣列檢測(cè)器(DAD)。色譜柱采用反相 250 mm×4.6 mm，5 μm的Zorbax SB-C18柱(Agilent Technologies)，流動(dòng)相 A：1.0% 的醋酸水溶液；流動(dòng)相 B：1.0% 醋酸甲醇溶液；洗脫程序；0-15 min，10%-26% B；15-30min，26%-40% B；30-50 min，40%-65% B；50-60 min，65%-95% B；60-63 min，95%~10% B；63-66 min，10% B isocratic；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。MSD 參數(shù)：離子源為ESI，采用負(fù)離子模式；霧化氣壓力為 30 psi；干燥氣流速為 10 mL/min；干燥氣溫度為325 ℃；離子掃描范圍為100-1500 m/z。CID的MS/MS 誘導(dǎo)碰撞能量為1.0 V。

配制8個(gè)濃度水平的混標(biāo)，每個(gè)水平重復(fù) 3 次，以各組分的平均峰面積（Area）對(duì)濃度（Amt，mg/L）在工作站中建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算果皮(干重)中非花色苷酚含量，單位為 mg/g。

B.葡萄酒中非花色苷酚類物質(zhì)提取檢測(cè)如下：

取2 ml待測(cè)酒樣，離心，經(jīng)過(guò) 0.22 μm 有機(jī)濾膜（尼龍）過(guò)濾，然后進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。采用 Agilent1200 系列 LC/MSD Trap-VL 高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)提取產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。流動(dòng)相 A 為 10%（V:V）乙酸水溶液，流動(dòng)相B為90%乙腈（V:V）和10%乙酸溶液，流動(dòng)相洗脫梯度為：0~5 min, 5.0~8.0% B；5~7 min，8.0~12.0% B；7~12 min，12.0~18.0% B；12~17 min，18~22% B；17~19 min，22~35% B；19~21 min，35~100% B；21~25 min，100% B；25~27 min，100~5% B。流動(dòng)相流速為 1.0 mL/min；柱溫為 25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)在 280 nm；進(jìn)樣量為2 μL；質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI），離子掃描范圍：100-1000 m/z，負(fù)離子模式；霧化氣壓力為 35 psi；干燥氣流速為 10 L/min；干燥氣溫度為 325℃；最大累計(jì)時(shí)間為 300 ms；Trap ICC：30000 units；CID 的 MS/MS 誘導(dǎo)碰撞能量為1.0 V。每個(gè)樣品重復(fù)進(jìn)樣兩次，做為 2 次技術(shù)重復(fù)。

由表1可知：0.5m和1m寬度白色反光膜以及1m寬度鋁制反光膜對(duì)葡萄果實(shí)百粒重有著提高作用，其中1m白色反光膜處理提高效果最為顯著。0.5m和1m寬度白色反光膜處理、0.5m和1m寬度綠色反光膜處理均較對(duì)照組提高了pH值。除0.5m寬度綠色反光膜外其他處理組可滴定酸均相較于對(duì)照組降低了可滴定酸含量，0.5m寬度白色、綠色、鋁制反光膜均較對(duì)照組提高了可溶性固形物含量，同時(shí)三種反光膜處理也顯著提高了還原糖的含量，1m寬度的綠色、鋁制反光膜也起到了提高還原糖含量的效果。

如圖2所示：二甲花翠素3-O-葡萄糖苷是單體花色苷組分中含量占比最高的，六種試驗(yàn)處理均對(duì)二甲花翠素3-O-葡萄糖苷含量有著提高作用，其中0.5m綠色反光膜處理效果最為顯著，提高了52.32％，其次0.5m寬度鋁制反光膜相較于對(duì)照組提高二甲花翠素3-O-葡萄糖苷含量47.74％。

如圖3所示：酒石酸是葡萄特有的有機(jī)酸，六種試驗(yàn)處理均降低了酒石酸的含量，其中0.5m和1m白色反光膜處理效果最為顯著，分別降低了30.67％、27.01％。

如圖4所示：0.5m白色、綠色、鋁制反光膜均相較于對(duì)照組提高了果實(shí)葡萄糖的含量，其中，0.5m寬度鋁制反光膜對(duì)果實(shí)葡萄糖含量的提高最為顯著，提升8.96％，同時(shí)三種反光膜0.5m寬度處理均比1m寬度處理對(duì)果實(shí)葡萄糖含量的提升作用更顯著。

如圖5所示：0.5m白色、綠色、鋁制反光膜均相較于對(duì)照組提高了果實(shí)果糖的含量，其中，0.5m寬度鋁制反光膜對(duì)果實(shí)果糖含量的提高最為顯著，提升7.74％，同時(shí)三種反光膜0.5m寬度處理均比1m寬度處理對(duì)果實(shí)葡萄糖含量的提升作用更顯著。

（1）反光膜處理對(duì)葡萄果實(shí)的葡萄糖、果糖、花色苷、可溶性固形物含量有促進(jìn)作用。

（2）0.5m寬度的反光膜相較于1m寬度的反光膜更適用于葡萄生長(zhǎng)周期，對(duì)葡萄果實(shí)葡萄糖、果糖、花色苷、可溶性固形物等物質(zhì)含量促進(jìn)效果更為顯著，同時(shí)更節(jié)約成本。

（3）反光膜對(duì)葡萄果實(shí)有機(jī)酸含量起到了降低作用。

尚需要對(duì)不同反光膜處理對(duì)葡萄果實(shí)和葡萄酒酚類物質(zhì)及揮發(fā)性香氣物質(zhì)進(jìn)行分析探究，尋求對(duì)煙臺(tái)產(chǎn)區(qū)釀酒葡萄綜合品質(zhì)提高最好的反光膜鋪設(shè)方式。